细胞工程期末考试

细胞冻存：是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术

花粉培养方法：花粉在培养基上改变其正常发育和机能，不经受精而发生细胞分裂，由单个花粉粒发育成完整单倍体植株的技术

无病毒苗：是未被病毒感染，或经人工处理去除病毒的植物苗株

原生质体融合（体细胞杂交）：将不同亲本的植物原生质体，通过人工方法诱导融合，然后进行离体培养，使其再生杂种植株的技术

初代培养：指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养

继代培养：在组织培养中，当培养物长到一定大小时，对其进行切分并转接到新鲜培养基上不断扩大培养数量的过程

原代培养：从机体取出组织细胞开始培养到第一次传代之前的时期
传代培养：原代培养物经消化处理后，收集洗涤，再分装至含有新鲜营养液的培养瓶中继续培养

胚胎的移植：又称为受精卵的移植，俗称人工授胎或借腹怀胎，是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外授精或其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术

• 细胞分裂素和生长素两者的浓度比值高低，对植物根芽的影响

  当植物生长素高于细胞分裂素时，促进根的分化、生长。
  当细胞分裂素高于植物生长素时，促进茎的分化、生长。

• 动物细胞培养最有效和最常用的培养成分：血清

• 大多数植物培养最适宜的温度：25℃，动物细胞培养最适宜温度：37℃

• 植物组织培养PH范围：5.6~5.8，动物细胞培养PH范围7.2~7.4

• 植物组织培养按照培养对象可以分为那些类型：器官培养、愈伤组织培养、胚培养、细胞培养、原生质体培养、茎尖分生组织培养

• 动物细胞原代培养的方法：组织块培养法、单层细胞培养法、悬浮细胞培养法

• 细胞冻存与复苏的原则：

• 植物胚的培养类型：成熟胚培养与幼胚培养

• 实验室消毒：甲醛和高锰酸钾

• 动物细胞超低温冷冻保存选择**——**时期的细胞做细胞悬液

• 典型的培养基中那些培养基无机盐浓度最低

• 植物生长调节物质对温度的敏感性

• 单个细胞或外植体形成愈伤组织经历那几个时期？

  • 诱导期
  • 分裂期
  • 分化期

• 病毒在植物体有那些分布规律？

• 母液与使用液的关系

• 组织培养与离体培养三大问题？

  • 污染
  • 褐变
  • 玻璃化

• 超低温保存的温度范围

• 植物外植体培养（初代培养）选择依据

  • 外植体:指植物离体培养中的各种材料。包括植物体的各个器官、组织、细胞的原生质体
  • 选择优良的种质
  • 选择健壮的植株
  • 选择最适的时期
  • 选取适宜的大小

• 原生质体分离的方法

  • 原生质体分离的方法分为机械分离法和酶解分离法
  • 机械分离法：先将细胞放在高渗糖溶液中预处理，待细胞发生轻微质壁分离，原生质体收缩成球形后，再用机械法磨碎组织，从伤口处可释放出完整的原生质体。
    • 优点是能排除酶的有害影响；
    • 缺点是原生质体的产量低；方法繁琐费力；局限性大（植物种类受到限制。（2分）
  • 酶法分离（Enzymatic isolation）：采用果胶酶、纤维素酶等酶类对植物细胞壁进行酶解，得到原生质体。
    • 优点是条件温和、原生质体完整性好、得率高，适合几乎所有植物或它们的器官、组织、细胞。
    • 缺点是酶制剂中均含有核酸酶、蛋白酶、过氧化物酶及酚类物质，影响原生质体的活力。

• 动物细胞融合概念方法

  • 动物细胞融合的概念：在细胞自然生长情况下，或在其他人为添加因素存在下，使同种细胞之间或不同种类细胞之间相互融合的过程，即为细胞融合（cell fusion）
  • 动物细胞融合的方法:
  • 自发细胞融合：是在未施加任何诱导条件的情况下所发生的细胞融合现象。自发细胞融合现象在自然界中并不多见，常见的主要有以下几种情况：
    精子和卵子受精、肌管的形成 、巨细胞的形成、破骨细胞的形成（1分）
  • 人工诱导细胞融合：人工诱导细胞融合是在人为条件下发生的细胞融合现象。常用的诱导方法有三种：
    • ① 生物法（病毒诱导法等）
    • ② 化学法 （PEG诱导法、Ca2+诱导法、 溶血卵磷脂诱导法等）
    • ③ 物理法（电诱导法等）

• MS培养基配置方法

  • 将母液按顺序摆放
  • 取适量的蒸馏水(所需培养基量的2/3)倒入容器
  • 按需要量依次取母液及生长调节物质
  • 加入蔗糖(30g/L)及琼脂(6-10g/L)，煮沸，2-3min
  • 定容
  • 调PH值(pH=5.8)
  • 分装培养瓶，封口
  • 高压灭菌

• 胚胎移植如何选择供体与受体？

  • 胚胎移植中供体指提供胚胎的个体，具有人类所需的优良遗传性状的个体。受体指接受胚胎的个体，具有正常的孕育、生殖后代的能力。
  • 供体应具有相当高的育种价值；供体生殖机能处于较高的状态；
  • 受体应容易购买，繁殖性能好，对地方适应性强，体型中上等，非优良品种；受体健康状况良好，已进入发情季节；
  • 供受体发情时间应接近或一致。

• 病毒引起作物产量下降，植物脱毒，病毒鉴定

  • 取材：一般多采用在室内发芽，芽经热处理（38℃）2周。然后取顶芽或侧芽1厘米的茎尖。
  • 消毒：在自来水下冲洗干净，无菌条件下先用70％的酒精浸润组织15-20秒，再用2％的次氯酸钠溶液浸泡4--5min，然后用无菌水冲洗3次。
  • 接种：把消毒好的芽放在解剖镜下仔细剥离，逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，可以留1-2个叶原基，0.2—0.3毫米，随即接种于MS液体培养基上，每升加0.1mgNAA 、 0.2mgGA3、0.5BA，2%蔗糖，p H值5.8。
    培养条件：21-25℃、2000-3000 lx、12h/d。（1分）
  • 继代和生根:培养成功的马铃薯脱毒苗，经鉴定后（试管苗应每3月检测一次，每年4次），采用固体、液体培养基相结合方法扩繁。取试管苗单节切段扦插在（或平放）固体培养基上，每瓶可插20个左右茎段，经20d左右发育成5~10cm高小植株，继续进行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖5~8倍，试管苗多节接种在液体培养基上，进行浅层静止液体培养。（1分）
    培养基：MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸钙10，3%蔗糖，20-25度，3000-4000LX，14-16小时光照，每3周继代一次，单芽茎段约1厘米，可插也可平放，原则试管苗用2年—3年。 （1分）
  • 无病毒苗鉴定（任选一种方法均可）
    • 接种液制备：叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状，用纱布滤出汁液。（1分）
    • 接种：在鉴定寄主植物的叶面，６００目的金刚砂混入接种物中，然后用左手心紧靠在寄主的背面，以右手实指蘸取接种液，均匀的在叶背面擦过，以不造成叶片产生伤痕为度，最后把叶面上多余的接种物用清水冲洗干净，放置在１５～２４的防虫室中。（1分）
    • 观察与判断：一般５－１０天可发病（1分）

• 转基因的两面性，谈谈自己的看法

  • 好的方面：面对不断扩张的世界人口以及人类活动造成的环境变化，极端气候的频繁出现和适宜耕种现有农作物的土地面积不断减少，使得人类的粮食生产安全受到很大的威胁。转基因可增加作物单位面积产量；可以降低生产成本；通过转基因技术可增强作物抗虫害、抗病毒等的能力；提高农产品的耐贮性，延长保鲜期，满足人民生活水平日益提高的需求；可使农作物开发的时间大为缩短；可以摆脱季节、气候的影响，四季低成本供应；打破物种界限，不断培植新物种，生产出有利于人类健康的食品
  • 不好的方面：转基因食品的安全性问题主要有：转基因作物可能本身成为杂草，转基因作物的亲缘野生种成为杂草或超级杂草，转基因作物可能产生新的病毒疾病，转基因作物对非目标生物的危害，破坏生物多样性，转基因作物对生态系统及生态过程的影响，其他一些不可预计的风险，转基因生物所引入的外源基因往往可以表达出蛋白质，可能会引起生物的代谢发生变化，造成该生物营养成分的改变。转基因生物成分的改变，特别是有毒物质、抗营养因子、过敏原等的含量发生变化，将影响该生物作为食品的安全性。转基因食品对人体可能会造成的危害：转基因作物中的毒素可引起人类急、慢性中毒或产生致癌、致畸、致突变作用，作物中的免疫或致敏物质可使人类机体产生变态或过敏反应。转基因食品中的主要营养成分、微量营养素及抗营养因子的变化，会降低食品的营养价值，使其营养结构失衡。

转基因的利弊