简化步骤、缩短时间、减少有害因素对核酸的破坏
减少化学因素对核酸的降解(PH 4~10)
防止核酸的生物降解(细胞内外各种核酸水解酶)
DNA酶需要金属离子Mg^{2+}、Ca^{2+}的激活,因此使用金属离子螯合剂
RNA酶分布广泛,极易污染样品,而且耐高温、耐酸碱、不易失活,生物降解是RNA提取过程中主要危害因素
减少物理因素对核算降解
加入SDS
破坏细胞膜,抑制核酸酶,使核酸从蛋白质上游离出来。
加入浓盐溶液(NaCl)
核酸-蛋白质加入NaCl后,破坏静电吸力,使氢键破坏,核蛋白解聚。
酚/氯仿抽提
增加去除蛋白质的效果,并对核酸酶有抑制作用。
沉淀核酸
去除溶液中某些盐离子杂质。
当核酸溶液的PH>4时,核酸分子呈多聚阴离子状态。
钾、钠、镁及铵根等
阳离子形成盐
,通过屏蔽带负电荷的磷酸基团
使DNA分子聚集在一起而不溶于许多有机溶剂。
优点:
对盐类沉淀少,沉淀中所含小剂量乙醇易挥发除去,不影响后续实验。
缺点:
需要量大,一般要求低温操作。
优点:
需要体积小,速度快,适于低浓度、体积大的DNA样品沉淀。不需要低温放置。
缺点:
易使盐类、蔗糖与DNA共沉淀,异丙醇难以挥发除去。
优点:
可选择利用不同的PEG
沉淀相对分子质量不同的DNA片段