细胞培养
1. 细胞培养的基本条件有哪些？
2. 常规体外培养细胞与体内培养一样吗？
3. 首次记录细胞培养成功是哪一年？
- 1856年，植物组织培养，利用红豆杉细胞培养生产紫杉醇
4. 视频中被誉为细胞培养之父的是哪位科学家？
5. 细胞培养基类型有哪些？
6. 视频中提到细胞大规模培养方法有哪些？
- 贴壁培养：细胞贴附在一定的固相表面进行培养
- 悬浮培养
- 固定化培养
植物组织培养的认知
1. 什么是植物组织培养？
- 植物组织培养是指在无菌和人工控制条件下，利用合适的培养基对植物的器官、组织、细胞或原生质体进行培养，使其按照人们的意愿生长、增值或再生完整植株的一门生物技术
2. 植物组织培养的理论基础是什么？
- 植物细胞的全能性，植物的每个细胞都包含着该物种的全部遗传信息，从而具备发育成完整植株的潜在能力。在适宜的条件下，任何一个细胞都可以发育成完整的新个体
3. 植物组织培养包括哪些类型？
- 愈伤组织培养
- 器官培养
- 胚培养
- 细胞培养
- 原生质体培养
- 遗传转化
4. 植物组织培养应用在哪些方面？
- 在植物脱毒和离体快繁的应用
- 育种应用
- 单倍体育种
- 胚胎培养
- 体细胞杂交
- 体细胞无性系变异
- 遗传转化
- 次生代谢物生产上的应用
- 在植物物种资源保存和交换上的应用
- 在遗传、生理、生化、病理等研究上的应用
细胞工程实验室及仪器设备2
1. 植物组织培养实验室的基本组成与要求。
- 组成：准备间、缓冲室、灭菌室、接种室、培养室。
- 条件：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。
2. 培养基的组成成分有哪几类，在离体培养中的功能是什么？
- 无机营养元素
- 大量元素（Na、P、K、Mg、S、Ca）
- 微量元素（Fe、B、Mn、Cu）
- 有机化合物
- 碳水化合物，功能：碳源，维持培养基的渗透压
- 维生素，功能：在细胞里以各种辅酶的形式参与各种细胞代谢
- 肌醇，功能：能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成
- 氨基酸，功能：很好的有机氮源，可以很好被细胞吸收
- 有机附加物质
- 植物生长调节物质
- 培养材料支持物质——琼脂
- 抗生物质
- 活性炭
- 水
3. 培养基的配制过程是什么？
- 母液的配置
- 将母液按顺序摆放
- 取适量的蒸馏水(所需培养基量的2/3)倒入容器
- 按需要量依次取母液及生长调节物质
- 加入蔗糖(30g/L)溶解
- 加琼脂(6-10g/L)，煮沸，2-3min
- 定容
- 调PH值(pH=5.8)
- 分装培养瓶，封口
- 高压灭菌
4. 文献检索：活性炭在植物组织培养中的应用
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预习
1. 外植体选择应注意哪些事项？
- 选择优良的种质及健康母珠
- 选择适当的取材时期
- 选取大小适宜的外植体
- 生理状态和发育年龄的选择
- 外植体的来源与选择部位
- 外植体要易于灭菌
2. 什么叫初代培养？其技术要点是什么？
- 初代培养:是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养
- 无菌培养物的建立
- 外植体的灭菌
- 培养环境的控制
- 外植体芽的诱导
3. 外植体灭菌一般要用到哪些试剂？
4. 什么是继代培养？操作要点是什么？
- 继代培养：是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上，这种转移称为继代培养或传代培养
预习
1. 试管苗生根注意事项有哪些？
- 植物材料的影响，外植体的来源、部位、年龄对根的分化都有影响。
- 生根培养基的影响，试管苗生根是从营养状态进入自养状态
- 植物生长调节剂的影响，生长素促进根的分化
- 活性炭有利于生根
- 继代培养的影响，新梢生根的能力随继代时间增长而增加
2. 试管苗驯化与移栽技术要点是什么？
- 试管苗驯化：提高组培苗对自然条件的适应性，从温度、光照、湿度及有无杂菌等环境因素考虑，原则：开始数天内，创造与试管培养条件相似的条件，后期选择与预栽培环境相似的条件逐步适应
- 试管苗移栽：苗床的准备、试管苗的出瓶
3. 提高试管苗移栽成活率途径有哪些？
- 组培苗的生理状况
- 使用植物生长调节剂促进根的生长
- 降级生根培养基无机盐的浓度
- 培养基中加入活性炭
- 及时出瓶移栽
- 选择适宜的栽培基质和灭菌处理
- 养分的及时补充
- 适宜的环境因素向有菌过度
- 让试管小苗从无菌
预习
1. 组织培养三大问题是什么？解决对策分别是什么？
- 污染：
- 严格进行培养基及其器械灭菌
- 外植体的选择与灭菌
- 保持环境条件洁净
- 规范使用超净工作台
- 褐变：
- 选择生长处于旺盛阶段的外植体
- 培养材料进行遮光培养或者暗培养
- 选择适宜的培养基，调整急速用量，控制机温度和光照，尽量降低温度，减少光照
- 选择年龄适宜的外植体材料进行组培
- 在培养基中加入抗氧化或其它抑制剂
- 连续转移的新的培养基上
- 添加活性炭吸附剂
- 玻璃化：
- 利用固体培养基，增加琼脂用量，降低培养基的衬质势
- 适当提高培养基中蔗糖的含量
- 适当的降低培养基中细胞分裂素和赤霉素的浓度
- 控制温度适当的低温处理
- 增加自然光照
- 增加培养基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu元素含量，降低N和Cl元素比例，特别是降低铵态氮的浓度，提高硝态氮的含量
- 改善培养基的通气条件
- 在培养基中加入间苯三酚和根皮苷
预习
1. 什么是体细胞无性系变异？其机理是什么？
- 体细胞无性系变异：是指植物体细胞在组织培养过程发生变异，进而导致再生植株发生遗传改变的现象
- 机理：培养基中的外源激素是诱导体细胞无性系变异的重要原因
2. 脱毒的意义是什么？
- 目前国内外解决作物病虫害的有效途径就是采用植物脱毒技术
- 病毒病害与真菌病害不同，不能通过化学杀菌剂或抗生素予以防止。
- 用化学杀虫剂消灭传播媒介昆虫能减轻一些病毒的蔓延，但对于机械传播，用化学杀虫剂则不能控制这类病毒
3. 脱毒的方法有哪些？
- 茎尖分生组织脱毒培养：根尖区病毒含量低
- 热处理脱毒
- 茎尖脱毒与热处理相结合
4. 怎样鉴定脱毒苗？
- 指示植物病毒鉴定法，在检测中具有观察的直观性，且要求的条件简单操作方便，成本低。灵敏性差，所需的时间长，难以区分病毒种类，不能检测出病毒总的核蛋白浓度，而且只能测出病的相对感染力
- 抗血清鉴定法：试管沉淀试验、凝胶扩散试验、免疫电泳技术、酶联免疫吸附分析法、荧光抗体技术
- 分子生物学方法
原生质体培养和体细胞杂交
1. 原生质体、亚原生质体的概念。
- 原生质体：去掉细胞壁的由质膜包裹、具有生活力的裸露细胞
- 亚原生质体：植物原生质体分离所得到的不完整原生质体
2. 为什么原生质体要培养在等渗培养基中？
为了保持释放出来的原生质体的活力和膜稳定性
3. PEG融合与电融合的原理。
- PEG融合原理：PEG分子具有轻微的负极性，与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成氢键。当PEG分子链足够长时，它在相邻原生质体表面之间有分子桥、改变膜表面物理化学性质和增加脂膜流动性作用，引发原生质体的粘连的作用。当PEG分子被洗脱后，膜上的电荷便重新分布，从而导致原生质体融合。
- 电融合的原理：电融合：指利用改变电场诱导原生质体彼此相连成串，再施以瞬间强脉冲电压促使质膜发生可逆性电击穿，达到原生质体融合的方法
4. 杂种细胞的获得和选择方法。
- 杂种细胞的获得
- 一个正常原生质体与一个去核原生质体融合
- 一个正常原生质体和一个核失活原生质体融合
- 异核体形成后，两个核中有一个消失
- 选择方法：