蛋白质的性质
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测定蛋白质相对分子质量(Mr)的方法
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测定蛋白质含量的方法
- 双缩脲法(肽键与双缩尿结构相似)
- 双缩尿在碱性溶液中能与硫酸铜反应,产生紫红色络合物
- 产生的颜色在540nm处比色,定量测定蛋白质
- 酚试剂(福林试剂)
- 蛋白质含有酪氨酸(Tyr,Y)
- 酪氨酸中的酚基能将福林试剂中的磷钼酸及**磷钨酸 **还原成蓝色化合物(钼蓝和钨蓝的混合物),此法比双缩尿灵敏度高
- 考马斯亮蓝染色法
- 蛋白质可用考马斯亮蓝在室温下染色,反应迅速,约2min可完成,生成物稳定,测定蛋白质含量的灵敏度较高,因此被广泛使用。
- 紫外吸收法
- 由于蛋白质分子中的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸在280nm左右有强烈的光吸收,可用这一性质测定溶液中的蛋白质含量。此法不需要任何反应,直接测定蛋白质溶液的A_{280nm} 和A_{260nm},蛋白质质量浓度(mg/ml)=1.45A_{280}-0.47A_{260nm}
- 这一方法准确度不很高,但是十分简单方便,在分子生物学实验中常用。
- 凯氏定氮法
- 测定包括可溶性蛋白和不溶性蛋白的总蛋白含量,常用凯氏定氮法,这一方法的缺点是不能区分蛋白氮和非蛋白有机氮,计算时,将所有的有机氮均看作蛋白氮,因此将计算出的蛋白含量称作粗蛋白含量。此外,计算时所用的系数6.25对某些蛋白质是不合适的,需要用校正后的系数。
- 蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化,使蛋白质分解,产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵,留在消化液中,然后加碱蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后,再用盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数,即得蛋白质含量。 因为食品中除蛋白质外,还含有其它含氮物质,所以此蛋白质称为粗蛋白。
- 其他方法 微量的可溶性蛋白还可用胶体金法和免疫学方法测定,有活性的蛋白质,如酶和激素,可直接测定其生物学活性。对蛋白质混合物进行凝胶电泳后染色,再进行扫描分析,或用图像分析系统对照片进行分析,可以测定各种蛋白质成分的相对含量。
蛋白质的分离
蛋白质的分析